科研服务

稳转细胞系的构建


客户只提供需要调控表达的基因详细信息及表达情况;提供病毒侵染所需细胞系相应细胞背景信息,确保细胞生长状态良好,适合病毒侵染实验;

我们提供以下服务:

1. 细胞实验、病毒载体构建实验、病毒颗粒包装实验、qPCRWestern等实验的场地、仪器设备、人员和实验操作相应的实验试剂耗材;

2. 细胞培养:对客户提供的细胞进行常规培养传代;

3. 病毒侵染效率评价:利用带GFP的阴性对照病毒对细胞进行侵染效率评价,侵染效率达到70%以上进行下游稳定株筛选实验;

  4. 干扰病毒载体构建针对客户提供的靶基因,设计3条干扰序列,构建到shRNA慢病毒穿梭载体,包装滴度为108的病毒,在侵染效率大于70%的前提下,确保其中至少有一个病毒对目的基因mRNA水平有70%的抑制效率;进行稳定株筛选;

过表达病毒载体构建:针对客户提供的靶基因构建到过表达慢病毒穿梭载体,包装滴度为108的病毒,侵染细胞后进行稳定株筛选;

  5. 有效干扰片段筛选:慢病毒侵染细胞采用qRT-PCR方法和Western Blots方法,筛选出一条最有效的shRNA慢病毒干扰片段

 6.干扰效果验证:筛选出来的一条最有效干扰片段的shRNA慢病毒,再次侵染细胞,采用qRT-PCR方法和Western Blots方法验证干扰效果

   过表达效果验证:病毒侵染细胞,采用qRT-PCR方法和Western Blots方法,检测目的基因/蛋白的表达效果

  7稳定株筛选和鉴定:针对细胞进行puromycin最小药物致死浓度实验,病毒表达检测正常后,再次侵染细胞,在嘌呤霉素压力下,筛选稳定株细胞,筛选完成后,扩大培养,并收取阴阳性细胞采用qRT-PCR方法和Western Blots方法验证基因表达情况, 鉴定完成后,给客户提供细胞一瓶。


   实验结束提供包含所有实验结果和详细实验记录资料的图表及其说明的电子版文本




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